Визначення альфа-фетопротеїну ґрунтується на використанні «сендвіч»-
варіанта твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок
планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти АФП людини. У
лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка, відбувається зв’язування
АФП, який міститься в досліджуваному зразку з антитілами на твердій фазі.

Комплекс, що утворився, виявляють за допомогою кон’югату мишачих
моноклональних антитіл протии АФП людини з пероксидазою хріну. У результаті
утворюється зв’язаний із твердою фазою «сендвіч», що містить пероксидазу. Під
час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) рідина у лунках
забарвлюється. Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна концентрації
альфа-фетопротеїну в досліджуваному зразку.

Концентрацію альфа-фетопротеїну
в досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком залежності
оптичної густини від вмісту альфа-фетопротеїну в калібрувальних пробах.