Визначення вільного естріолу ґрунтується на використанні конкурентного
імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета
іммобілізовані кролячі поліклональні антитіла проти естріолу. Вільний естріол із
зразка конкурує з кон’югованим естріолом за зв’язування із антитілами на
поверхні лунки.

В результаті утворюється зв’язаний із твердоюю фазою
комплекс, що містить пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату
тетраметилбензидину (ТМБ) рідина в лунках забарвлюється. Інтенсивність
забарвлення обернено пропорційна концентрації вільного естріолу в
досліджуваному зразку.

Концентрацію вільного естріолу в досліджуваних зразках
визначають за калібрувальним графіком залежності оптичної густини від вмісту
вільного естріолу в калібрувальних пробах.