Визначення тестостерону ґрунтується на використанні конкурентного
імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані
антитіла проти вільного тестостерону. Тестостерон зі зразка конкурує з
кон’югованим тестостероном за зв’язування з антитілами на поверхні лунки.

У результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою комплекс, що містить
пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ)
рідина в лунках забарвлюється. Інтенсивність забарвлення оберненно
пропорційна концентрації вільного тестостерону в досліджуваному зразку.

Концентрацію вільного тестостерону в досліджуваних зразках визначають за
калібрувальним графіком залежності оптичної густини від вмісту вільного
тестостерону в калібрувальних пробах.