Визначення вільного тироксину ґрунтується на використанні конкурентного
імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані
мишачі моноклональні антитіла проти T4. Вільний тироксин зі зразка конкурує з
кон’югованим Т4 за зв’язування з антитілами на поверхні лунки.

У результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою комплекс, що містить пероксидазу. Під
час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) рідина у лунках
забарвлюється. Інтенсивність забарвлення обернено пропорційна концентрації
вільного тироксину в досліджуваному зразку.

Концентрацію вільного тироксину в
досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком залежності
оптичної густини від вмісту вільного тироксину в калібрувальних пробах.