Визначення вільного ПСА ґрунтується на використанні «сендвіч»-варіанта
твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета
іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти загального ПСА людини. У
лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка відбувається зв’язування
вільного ПСА, який міститься в досліджуваному зразку, з антитілами на твердій
фазі.

Комплекс, що утворився, виявляють за допомогою кон’югату мишачих
моноклональних антитіл проти вільного ПСА людини з пероксидазою хріну. У
результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою «сендвіч», що містить
пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ)
рідина у лунках забарвлюється.

Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна
концентрації вільного ПСА в досліджуваному зразку. Концентрацію вільного ПСА в
зразках визначають за калібрувальним графіком залежності оптичної густини від
вмісту вільного ПСА в калібрувальних пробах.