Визначення пролактину ґрунтується на використанні «сендвіч»-варіанта
твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета
іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти пролактину людини. У
лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка відбувається зв’язування
пролактину, що місятиться в досліджуваному зразку з антитілами на твердій фазі.

Комплекс, що утворився, виявляють за допомогою кон’югату мишачих
моноклональних антитіл проти пролактину людини з пероксидазою хріну. У
результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою «сендвіч», що містить
пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ)
рідина у лунках забарвлюється.

Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна
концентрації пролактину в досліджуваному зразку. Концентрацію пролактину в
досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком залежності
оптичної густини від вмісту пролактину в калібрувальних пробах.