Визначення С-пептиду ґрунтується на використанні «сендвіч»-варіанта
твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок
планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти С-пептиду
людини. У лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка, відбувається
зв’язування С-пептиду, що міститься в досліджуваному зразку, з антитілами на
твердій фазі.

Комплекс, що утворився, виявляють за допомогою кон’югату мишачих
моноклональних антитіл проти С-пептиду людини з пероксидазою хріну. У
результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою «сендвіч», що містить
пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину
(ТМБ) рідина в лунках забарвлюється.

Інтенсивність забарвлення прямо
пропорційна концентрації С-пептиду в досліджуваному зразку. Концентрацію
С-пептиду в досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком
залежності оптичної густини від вмісту С-пептиду в калібрувальних пробах.