Визначення тестостерону ґрунтується на використанні конкурентного імуноферментного аналізу. На
внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти тестостерону.
Тестостерон зі зразка конкурує з кон’югованим тестостероном за зв’язування з антитілами на поверхні лунки.

У результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою комплекс, що містить пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) рідина у лунках забарвлюється. Інтенсивність забарвлення обернено пропорційна концентрації тестостерону в досліджуваному зразку. Концентрацію тестостерону в досліджуваних разках визначають за калібрувальним графіком залежності оптичної густини від вмісту тестостерону в калібрувальних пробах.