Визначення тестостерону ґрунтується на використанні конкурентного
імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані
мишачі поліклональні антитіла проти тестостерону. Тестостерон зі зразка конкурує
з кон’югованим тестостероном за зв’язування з антитілами на поверхні лунки.

У результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою комплекс, що містить
пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ)
рідина у лунках забарвлюється. Інтенсивність забарвлення обернено пропорційна
концентрації тестостерону в досліджуваному зразку.

Концентрацію тестостерону в досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком залежності
оптичної густини від вмісту тестостерону в калібрувальних пробах.