Визначення тропоніну І ґрунтується на використанні «сендвіч»-варіанта твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти тропоніну І людини. У лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка відбувається зв’язування тропоніну І, що міститься в досліджуваному зразку, з антитілами на твердій фазі.

Комплекс, що утворився, виявляють за допомогою кон’югату мишачих моноклональних антитіл проти тропоніну І людини з пероксидазою хріну. У результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою «сендвіч», що містить пероксидазу.

Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) рідина в лунках забарвлюється. Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна концентрації тропоніну І в досліджуваному зразку. Концентрацію тропоніну І в досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком залежності оптичної густини від вмісту тропоніну І в калібрувальних пробах.