Визначення тироксину ґрунтується на використанні конкурентного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти T4. Тироксин із зразка конкурує з кон’югованим T4 за зв’язування з антитілами на поверхні лунки. У результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою комплекс, що містить пероксидазу.

Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) рідина в лунках
забарвлюється. Інтенсивність забарвлення обернено пропорційна концентрації
тироксину в досліджуваному зразку. Концентрацію тироксину в досліджуваних
зразках визначають за калібрувальним графіком залежності оптичної густини від
вмісту тироксину в калібрувальних пробах.