Визначення інсуліну ґрунтується на використанні «сендвіч»-варіанта
твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок
планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти інсуліну
людини. У лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка,
відбувається зв’язування інсуліну, що міститься в досліджуваному зразку, з
антитілами на твердій фазі.

Комплекс, що утворився, виявляють за допомогою кон’югату мишачих
моноклональних антитіл проти інсуліну людини з пероксидазою хріну. У
результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою «сендвіч», що містить
пероксидазу. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину
(ТМБ) рідина в лунках забарвлюється.

Інтенсивність забарвлення прямо
пропорційна концентрації інсуліну в досліджуваному зразку. Концентрацію
інсуліну в досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком
залежності оптичної густини від вмісту інсуліну в калібрувальних пробах.