Визначення 17-ОН-Прогестерону ґрунтується на використанні конкурентного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані кролячі поліклональні антитіла проти 17-OHПрогестерону. 17-OH-Прогестерон зі зразку конкурує з кон’югованим 17-OHПрогестероном за зв’язування із антитілами на поверхні твердої фази. В результаті утворюється зв’язаний із твердою фазою комплекс, що містить
пероксидазу.

Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) рідина у лунках забарвлюється. Інтенсивність забарвлення обернено пропорційна концентрації 17-ОН-Прогестерону в досліджуваному зразку. Концентрацію 17-ОН-Прогестерону в досліджуваних зразках визначають за калібрувальним графіком залежності оптичної густини від вмісту 17-ОНПрогестерону в калібрувальних пробах.