Виявлення специфічних IgM антитіл проти Treponema pallidum ґрунутється на використанні непрямого варіанту твердофазного імуноферментного аналізу. На внутрішній поверхні лунок планшета іммобілізовані мишачі моноклональні антитіла проти IgM людини.
В лунках планшета, при додаванні досліджуваного зразка, під час інкубації відбувається специфічне зв’язування IgМ антитіл, що містяться в досліджуваному зразку, і антитіл на твердій фазі. Відмивання лунок планшета дозволяє видалити надлишок компонентів, що не прореагували.
Під час інкубації з кон’югатом відбувається утворення імунного комплексу «мишачі моноклональні анти-IgМ антитіла – специфічні IgМ антитіла (досліджуваний зразок) – антигени Treponema pallidum, кон’юговані з пероксидазою хріну (кон’югат)».
Відмивання лунок планшета дозволяє видалити надлишок компонентів, що не прореагували. Під час інкубації з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) відбувається специфічне зв’язування пероксидази (кон’югат) з розчином субстрату тетраметилбензидину (ТМБ), що супроводжується зміною забарвлення вмісту лунок.
Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна концентрації специфічних IgM антитіл проти антигену Treponema pallidum в досліджуваному зразку. Реєстрація результатів реакції проводиться вимірюванням оптичної густини вмісту лунок планшета на спектрофотометрі при довжині хвилі 450 нм.
